組織構成 cell―tissue―organ―organ system―個体
tissue 同じような機能を持つ細胞の集団
・ 神経組織
・ 筋組織 :骨格筋、心筋、平滑筋
・ 上皮組織:腺も上皮
・ 結合組織
organ 複数のtissueが集まってまとまった働きを持ったものex)腎臓
organ system 同じような働きを持ったorganのsystem ex)消化器系
細胞研究法(実験法)
1)光学顕微鏡
*分解能(解像力) 約0.2μm=200nm
厚さ 3μm
・染色 *ヘマトキシン・エオジン染色――・核:青byヘマトキシン
・細胞質:赤byエオジン
*マッソン・トリクローム染色――・結合組織:青
ex)膠原線維
2)TEM(transmission electron microscope)
透過型―内部構造
*分解能 約0.5nm
・超薄切片法(厚 0.05〜0.1μm):微細構造
・フリーズフラクチャー法:生体膜構造
(凍結割断法)
・フリーズエッチング法:細胞骨格
(凍結エッチング法)
3)SEM(scanning electron microscope)
走査型―表面構造
4)遠心分画法
*organelle分画:無細胞系における機能、化学組成、酵素について調べるため
5)オートラジオグラフィー法(ARG法)
*RI(放射性同位元素)で細胞内分子移動追跡 ex)代謝経路
30P、3H、14C、35S、131I
6)酵素組織細胞化学
*酵素活性の局在性を知るための可視化
ex)Phosphatase脱リン酸酵素のアルカリ性条件下での小腸上皮細胞活性
7)免疫組織細胞化学
*目的物質の局在性を知るための可視化
・間接蛍光抗体法(in vivo 生体内で)
*細胞→ 一時抗体→ 二次抗体= 抗原抗体反応
抗原 可視化できない 蛍光標識 局在性わかる
*RIA(ラジオイムノアッセイ法)
二次抗体をRIで標識
・ELSA法(エライザ法):二次抗体を発色標識
*EIA(engyme immuno assay法)
二次抗体と酵素とが反応して発色し標識となる
8)組織培養法
*organ,tissue,cell―分離(生体外:hormone,神経系の支配外、均一細胞集団)で
・細胞相互作用
・sygnalへの応答
を調べやすい
培地:牛の胎児の血清、アミノ酸、グルコース、ビタミン
9)遺伝子工学
*組み換えDNA技術
遺伝子DNA―――→ DNA fragment――――→キメラDNA―――→クローニング
制限酵素 断片 ligase(のり) 宿主細胞へ ex)インスリン量産
vector(運び屋)に組み込む
ex) plasmid
(bacteriaにある自己複製能力を持つ環状DNA)
・PCR法(polymerase chain reaction)
特定のDNA配列→大量に増幅:バクテリアを必要としない
*病原菌の特定
*科学捜査
*親子関係
☆遺伝子診断:病気前に治病
ex)テーラーメイド医療
ゲノム:30億の塩基対
99%共通
0.1%:3万〜4万遺伝子=個人差→体質の差
SNPs(単一塩基多型):0.1%の一塩基だけ違う
Single nucleotide polymorphism